2-[[[(5-溴-4-氯-1H-吲哚-3-基)氧基]羟基亚膦酰]氧基]-N,N,N-三甲基乙铵内盐
[CAS# 439809-43-5]

基本信息

• 产品分类: 有机原料 >> 杂环化合物 >> 吲哚化合物
• 英文名: 2-[[[(5-Bromo-4-chloro-1H-indol-3-yl)oxy]hydroxyphosphinyl]oxy]-N,N,N-trimethylethanaminium inner salt
• 别名: 5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl choline phosphate
• 产品名称: 2-[[[(5-溴-4-氯-1H-吲哚-3-基)氧基]羟基亚膦酰]氧基]-N,N,N-三甲基乙铵内盐
• 分子式: C₁₃H₁₇BrClN₂O₄P
• 分子量: 411.62
• CAS 登录号: 439809-43-5
• 分子行输入简码SMILES: C[N+](C)(C)CCOP(=O)([O-])OC1=CNC2=C1C(=C(C=C2)Br)Cl

安全数据

• 危险品标志: GHS07 Warning
• 危害标签: H302-H315-H319-H335
• 防护标签: P261-P305+P351+P338

发现和应用

2-[[(5-溴-4-氯-1H-吲哚-3-基)氧基]羟基亚膦酰基]氧基]-N,N,N-三甲基乙铵内盐是一种合成的有机磷化合物，在组织化学和免疫分析应用中用作检测碱性磷酸酶 (AP) 活性的显色底物。该分子通常缩写为 BCIP（5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸盐），其最广泛使用的形式是与 NBT（硝基蓝四唑）偶联形成 BCIP/NBT 底物系统，从而实现比色分析中的高灵敏度检测。

BCIP 的开发是 20 世纪为基于酶的检测系统开发底物而开展的广泛努力的一部分。碱性磷酸酶是一种存在于多种组织中的酶，广泛用于免疫学和分子检测中的报告基因，它能催化磷酸酯的水解。研究人员寻求稳定、无毒的底物，使其在酶促裂解后能够产生不溶性且肉眼可检测的产物。BCIP分子被设计成磷酸酯基团连接到取代的吲哚结构上，使其能够进行酶促水解，然后氧化生成显色产物。

与碱性磷酸酶反应后，BCIP中的磷酸基团被裂解，生成中间体5-溴-4-氯-3-吲哚氧基。该中间体随后在氧气存在下氧化，或最好与NBT等氧化剂结合，形成主要由5,5'-二溴-4,4'-二氯靛蓝和还原NBT（甲臜）组成的不溶性紫色沉淀。这种不溶性有色产物沉淀在酶活性位点，从而能够精确定位组织切片、膜或微孔板孔中的AP。

BCIP 已成为非放射性检测方法的标准，尤其是在蛋白质印迹法、Southern 印迹法和原位杂交法中。在这些技术中，抗体或核酸探针用碱性磷酸酶标记，并以 BCIP 作为显色底物。紫色沉淀的形成表明存在靶抗原或核酸序列。这为检测事件提供了可见且永久的记录，可供存档和查阅。

在组织化学应用中，BCIP 用于可视化组织样本中的碱性磷酸酶活性。它与 NBT 一起在维持酶活性的缓冲溶液中使用。与底物系统孵育的组织切片在碱性磷酸酶表达区域会呈现深紫色。这可用于绘制正常和病理条件下的酶分布图，包括对肝脏、肠道、肾脏和骨组织的研究，这些组织中的碱性磷酸酶 (AP) 具有生理活性。

BCIP/NBT系统也广泛应用于免疫细胞化学和免疫组织化学，在涉及标记抗体的检测中用作显色检测系统。其优势之一是高灵敏度和显色沉淀的稳定性，沉淀不会扩散，并能提供高分辨率染色。此外，该系统无需使用放射性物质，为研究和诊断目的提供了更安全的替代方案。

该化合物通常以粉末或溶液形式提供，需要避光以防止降解。使用BCIP的检测通常在碱性pH值（约pH 9.5）下进行，该pH值最有利于碱性磷酸酶的活性。缓冲液的选择以及金属离子或螯合剂的存在会显著影响酶活性和底物稳定性。

2-[[(5-溴-4-氯-1H-吲哚-3-基)氧基]羟基膦基]氧基]-N,N,N-三甲基乙铵内盐因其有效性，在分子生物学、组织学和临床诊断中仍然是至关重要的试剂。它在实现精确、永久和非放射性检测方面的作用，持续支持着广泛的生物和生物医学研究应用。